巴氏染色巴氏染色的操作方法及注意事项
作者：佚名 更新日期：2025-06-16
巴氏染色的操作方法及注意事项主要包括四个步骤和一系列精细的细节处理。这一技术旨在清晰展示细胞结构，提高透明度，并确保适当的分色，以达到细胞学诊断的准确性和可靠性。
固定是制片过程中至关重要的一步。不同类型的标本需采用不同的固定方法。酒精作为最常用的固定液，尤其是95%酒精，能有效防止细胞内的酶分解蛋白质，凝固细胞内物质，如蛋白质、脂肪和糖类，使之保持与生活状态相似的成分。这有助于细胞各部分，尤其是核染色质的着色。对巴氏染色而言，酒精固定尤为重要。若酒精浓度不足，可能会导致固定效果不佳，引起细胞的人为变化，从而可能导致假阳性或假阴性的诊断结果。
在固定过程中，应采用湿固定法。制片完成后，应立即放入盛有95%酒精的固定缸内，至少保持15-30分钟。固定时间不应超过一周。在染色后，湿固定法能够确保颜色鲜艳且结构清晰。对于需要送往其他实验室或邮寄的标本，可以在固定15分钟后取出，加入甘油后密封，以防止干燥。
核染色是巴氏染色的关键步骤之一。苏木素液的浸染时间通常在3-5分钟，但需根据气温和染料情况适当调整。夏季或旧染液着色快，时间应缩短；冬季或新配染液不易着色，时间应延长。苏木素染色时，有两种方法可供选择：过染法和淡染法。过染法在酸化过程中能够去除胞浆内多余的苏木素染料，使胞浆染色更为鲜艳、清晰，适用于黏液多的标本。淡染法则在核染色过程中严格控制染色时间，避免后续的酸化和自来水冲洗过程导致细胞成片脱落，适用于黏液少的标本。
胞浆染色在巴氏方法中称为OG-EA染色。橘黄G（OG）和EA的使用需注意时间控制，一般不宜过长，通常在1-2分钟内完成。此步骤对于宫颈、阴道上皮中非正常角化细胞和角化型鳞癌细胞的胞浆着色尤为重要，能呈现出鲜艳的橘黄色。
透明和封固是染色流程的最后两步。透明步骤旨在减少细胞的重叠影响，避免空气干燥的影响，确保制片在长期存放时颜色不变退。封固步骤则使用二甲苯调配的中性树胶，以避免二甲苯溶液出现颜色或浑浊。透明和封固之间的步骤至关重要，以确保最终结果的清晰度和稳定性。
综上所述，巴氏染色的操作方法和注意事项涵盖了固定、核染色、胞浆染色、透明及封固等多个环节。通过精细的步骤控制和严格的操作规范，巴氏染色能够提供清晰、准确的细胞学诊断结果，为病理学研究和临床诊断提供有力支持。
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固定是制片过程中至关重要的一步。不同类型的标本需采用不同的固定方法。酒精作为最常用的固定液，尤其是95%酒精，能有效防止细胞内的酶分解蛋白质，凝固细胞内物质，如蛋白质、脂肪和糖类，使之保持与生活状态相似的成分。这有助于细胞各部分，尤其是核染色质的着色。对巴氏染色而言，酒精固定尤为重要。若酒精浓度不足，可能会导致固定效果不佳，引起细胞的人为变化，从而可能导致假阳性或假阴性的诊断结果。
在固定过程中，应采用湿固定法。制片完成后，应立即放入盛有95%酒精的固定缸内，至少保持15-30分钟。固定时间不应超过一周。在染色后，湿固定法能够确保颜色鲜艳且结构清晰。对于需要送往其他实验室或邮寄的标本，可以在固定15分钟后取出，加入甘油后密封，以防止干燥。
核染色是巴氏染色的关键步骤之一。苏木素液的浸染时间通常在3-5分钟，但需根据气温和染料情况适当调整。夏季或旧染液着色快，时间应缩短；冬季或新配染液不易着色，时间应延长。苏木素染色时，有两种方法可供选择：过染法和淡染法。过染法在酸化过程中能够去除胞浆内多余的苏木素染料，使胞浆染色更为鲜艳、清晰，适用于黏液多的标本。淡染法则在核染色过程中严格控制染色时间，避免后续的酸化和自来水冲洗过程导致细胞成片脱落，适用于黏液少的标本。
胞浆染色在巴氏方法中称为OG-EA染色。橘黄G（OG）和EA的使用需注意时间控制，一般不宜过长，通常在1-2分钟内完成。此步骤对于宫颈、阴道上皮中非正常角化细胞和角化型鳞癌细胞的胞浆着色尤为重要，能呈现出鲜艳的橘黄色。
透明和封固是染色流程的最后两步。透明步骤旨在减少细胞的重叠影响，避免空气干燥的影响，确保制片在长期存放时颜色不变退。封固步骤则使用二甲苯调配的中性树胶，以避免二甲苯溶液出现颜色或浑浊。透明和封固之间的步骤至关重要，以确保最终结果的清晰度和稳定性。
综上所述，巴氏染色的操作方法和注意事项涵盖了固定、核染色、胞浆染色、透明及封固等多个环节。通过精细的步骤控制和严格的操作规范，巴氏染色能够提供清晰、准确的细胞学诊断结果，为病理学研究和临床诊断提供有力支持。
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